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            CAR-NK細胞殺傷實驗

            常州費洛斯藥業科技有限公司...

                    自然殺傷NK細胞是人體先天免疫(innate immunity)的重要組成部分,該類細胞可以在不受MHC抗原呈遞限制條件下識別并殺傷被細菌感染或轉化為腫瘤的細胞,且NK細胞相對于T細胞具有更好的臨床安全性。

                    費洛斯的CAR-NK細胞療法平臺從早期靶點抗體序列的發現到CAR-NK的功能性研究,每一個階段均具有成熟的研發體系。實驗室配備流式細胞儀、多功能酶標儀等先進的儀器設備,并建立了多種分析檢測實驗平臺,如:LDH法,DELFIA法,熒光霉素報告,Calcein AM染色法應對不同項目。

             

                     DELFIA試劑盒檢測靶向人mesothelin的CAR-NK殺傷效果實驗流程

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            案例展示:anti-MSLN CAR NK細胞對卵巢癌細胞SK-OV-3殺傷檢測

            1. CAR載體構建:將含針對MSLN靶點單鏈抗體的二代經典CAR分子構建到慢病毒載體中,并包裝得到MSLN-CAR慢病毒。其結構如圖所示。

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            2. CAR-NK細胞獲得:在293T中進行慢病毒包裝,72h后收取含病毒上清并進行滴度檢測,復蘇我公司自主擴增的NK細胞并活化,病毒轉化72h后流式檢測CAR表達情況

            3. 殺傷活性檢測:使用DELFIA方法檢測殺傷,在細胞培養96孔板中,加入每孔4000個靶細胞。在根據不同效靶比加入CAR-NK細胞共孵育4小時,取上清加入DELFIA檢測底物中,使用時間分辨熒光酶標儀進行檢測。

            4. 計算殺傷活性:以下公式進行特異性殺傷計算,圖例

            (樣品讀數-靶細胞自釋放讀數)÷(最大釋放讀數-靶細胞自釋放讀數)×100%

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